產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步法 SDS 清除試劑盒
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
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BC101 |
BcMag?一步法 SDS 清除試劑盒
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BC102 |
BcMag?一步法 SDS 清除試劑盒
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產(chǎn)品信息 |
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組成 |
二氧化硅基質(zhì)，表面覆蓋有高密度化學(xué)磁性樹脂的磁珠 |
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穩(wěn)定性 |
短期保存 (<1小時(shí)): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 可溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑 |
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磁化強(qiáng)度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁 |
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成分 |
100 mg / ml溶于d2H2O |
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結(jié)合力 |
48 μg/每毫克磁珠 |
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儲存 |
室溫運(yùn)輸，收到后保存在 4°C . |
簡介
十二烷基硫酸鈉是溶解生物材料最常用的洗滌劑之一。然而，過量的未結(jié)合洗滌劑會干擾許多下游應(yīng)用，如質(zhì)譜（MS）和氨基酸測序、抗原抗體結(jié)合、免疫沉淀分析和ELISA。目前有幾種通用的SDS去除方案，如長時(shí)間透析、陰離子交換色譜、離心柱法和丙酮沉淀法等。然而，這些方式要么費(fèi)時(shí)費(fèi)力，要么會丟失樣本，或者不適用于小批量樣本或高通量自動化的實(shí)驗(yàn)要求。我們開發(fā)出了一種新型、高效的SDS去除系統(tǒng)來克服這些限制。 BcMag? One-Minute SDS Removal Magnetic Beads它是用專有化學(xué)磁性樹脂修飾的二氧化硅磁珠。該樹脂可以快速有效地從非常小體積的蛋白質(zhì)/多肽或DNA/RNA溶液中去除游離SDS（十二烷基硫酸鈉）。本款磁珠可以在不到10分鐘的時(shí)間內(nèi)同時(shí)處理96個(gè)樣品。
本款磁珠可以快速有效地從樣品中去除游離SDS。過程非常簡單（圖1）。1.直接將磁珠添加到樣品中。2.用移液器吹吸或渦旋方式捕捉游離SDS洗滌劑。3.將磁珠從蛋白質(zhì)或DNA/RNA溶液中分離，純凈的蛋白質(zhì)或DNA/RNA留在溶液中。與標(biāo)準(zhǔn)滴液柱法和分批法相比，易于使用的磁珠顯著改善了純化結(jié)果，使蛋白質(zhì)損失降低到最小（<10%）。由于使用的磁珠體積很小，因此，樣品的最終蛋白質(zhì)濃度不會有顯著降低。
優(yōu)勢及特點(diǎn)
l 簡單的操作過程：無液體轉(zhuǎn)移，僅需一管，一步操作，過程僅需1分鐘
l 方便快捷
l 結(jié)果真實(shí)可靠可重復(fù)性高：對于蛋白質(zhì)（>6 kDa，抑肽酶）或DNA/RNA（>25mer雙鏈DNA）樣品回收率>90%。
l 高效的清除效率：可去除95%的游離清潔劑
l 性價(jià)比高：無需離心柱、過濾器、不用反復(fù)的重復(fù)移液和使用有機(jī)試劑。
l 可用于高通量實(shí)驗(yàn)：與許多不同的全自動核酸提取系統(tǒng)兼容。
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Products |
Catalog # BC-101 |
Catalog # BC-102 |
Catalog # BC-103 |
Catalog # BC-104 |
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BcMag? One-minute SDS Removal Magnetic Beads |
1 ml |
5 ml |
25 ml |
100 ml |
操作協(xié)議
A.材料準(zhǔn)備
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據(jù)樣品體積，用戶可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個(gè)單獨(dú)的50毫升離心管，1個(gè)單獨(dú)的15毫升離心管, 以及4個(gè) 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調(diào)單通道和多通道移液器 |
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擺斗離心機(jī) |
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如果使用96孔PCR板/管，則需要添加項(xiàng)目 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時(shí)間和速度應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，并且混合器應(yīng)滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉(zhuǎn)速 ≥ 2000 rpm |
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Eppendorf? MixMate? |
Eppendorf, Cat#:5353000529 |
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Tube Holder PCR 96 |
Eppendorf, Cat#: 022674005 |
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Tube Holder 1.5/2.0 mL, for 24?×?1.5 mL or 2.0 mL |
Eppendorf, Cat#: 022674048 |
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Smart Mixer, Multi Shaker |
BenchTop Lab Systems, Cat#:5353000529 |
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1.5/2.0 mL 離心管 |
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96孔PCR板或者 8孔 PCR 管 |
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PCR 板/管 ** IMPORTANT! 如果使用其他管或PCR板，確保PCR管或PCR板錐形部分底部的井徑必須≥2.5毫米。 |
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如果使用96孔微孔板需要添加的設(shè)備 |
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Fisher Scientific? Microplate Advanced Vortex Mixers |
Fisher, Cat#:02-216-101 |
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OHAUS Microplate Vortex Mixers |
OHAUS, Cat#:30392160 |
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渦懸混合器 **用戶還可以使用其他型號的渦懸混合器。但是，時(shí)間和速度應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化，并且混合器應(yīng)滿足: 扭矩 ≥1.5 mm-4 mm, 轉(zhuǎn)速 ≥800 rpm |
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平底透明的非結(jié)合型分析微孔板 |
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B.操作過程
1. 震動試劑瓶，使磁珠重新懸浮，直到完全均勻。
重要提示：每2分鐘重新懸浮一次磁珠。分液前必須將磁珠混合。分液時(shí)，不要讓磁珠靜置超過2分鐘。
2. 向含有洗滌劑樣品中加入適量的磁珠。
重要提示：用戶應(yīng)根據(jù)磁珠的結(jié)合能力（48 μg/每毫克磁珠）優(yōu)化游離的洗滌劑和磁珠使用比例。
**結(jié)合能力測定條件：在0.1M磷酸鈉、0.15M NaCl、pH7緩沖液中，將10μl磁珠（100 mg/ml）和100μl含有洗滌劑蛋白質(zhì)樣品（1:400稀釋的人血清）混合。并以2000 rpm的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5分鐘。
3. 將樣品與珠子混勻，在1-2分鐘內(nèi)通過移液器緩慢上下移液20-25次，或以2000 rpm（PCR
管）或800 rpm（Elisa板）的轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)樣品5分鐘。
重要提示：如果使用渦旋混合器，用戶需要優(yōu)化其工作的速度和時(shí)間。
4. 將反應(yīng)板或樣品管放在磁力分離器上30秒或直到溶液澄清。
5. 將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的反應(yīng)板/試管中，同時(shí)將原反應(yīng)板保留在磁力分離器上。純化好的
樣品已可用于下游應(yīng)用。
C.問題及建議
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Problem |
Probable cause |
Suggestion |
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蛋白回收率低 |
渦旋時(shí)間太長. |
· 如果使用其他型號的渦旋振蕩器，則必須優(yōu)化渦旋條件，如速度和時(shí)間。 |
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磁珠用量太多 |
完全重新懸浮磁珠，并減少磁珠的用量。 |
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洗滌劑清除失敗 |
使用了不合適的試劑管或PCR板 |
確保試劑管或板錐形部分底部的井徑為≥2.5毫米。 |
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渦旋速度太慢或者渦旋時(shí)間太短
樣品中含有太多的 SDS |
· 增加速度或者時(shí)間 · 如果使用其他型號的渦旋振蕩器，則必須優(yōu)化渦旋條件，如速度和時(shí)間。 · 使用更多的磁珠重復(fù)操作過程使 |
D.參考文獻(xiàn)
1. Puchades M, Westman A, Blennow K, Davidsson P. Removal of sodium dodecyl sulfate from protein samples prior to
matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Rapid Commun Mass Spectrom. 1999;13(5):344-9.
2. Ilavenil, S., Al-Dhabi, N.A., Srigopalram, S. et al. Removal of SDS from biological protein digests for proteomic analysis by
mass spectrometry. Proteome Sci 14, 11 (2016).
3. Oscar H. Kapp, Serge N. Vinogradov, Removal of sodium dodecyl sulfate from proteins,Analytical Biochemistry,Volume 91,
Issue 1,1978.
4. Doucette, and A. Crowell, "Precipitation of Detergent-Containing Samples for Top-Down and Bottom-Up Proteomics", in
Proteomics Technologies and Applications. London, United Kingdom: IntechOpen, 2019, Pages 230-235
5. Hou, H., He, H. & Wang, Y. Effects of SDS on the activity and conformation of protein tyrosine phosphatase from thermus
thermophilus HB27. Sci Rep 10, 3195 (2020).
6. Sun D, Wang N, Li L. Integrated SDS removal and peptide separation by strong-cation exchange liquid chromatography for
SDS-assisted shotgun proteome analysis. J Proteome Res. 2012 Feb 3;11(2):818-28.
