產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
單鏈DNA一步法去除試劑盒：
不費吹灰之力獲得最高質(zhì)量的DNA
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產(chǎn)品名稱 |
單位規(guī)模 |
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AW101 |
BcMag公司? 單鏈DNA一步法去除試劑盒 |
1毫升 |
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AW102 |
BcMag公司? 單鏈DNA一步法去除試劑盒 |
3毫升 |
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一步法單鏈DNA去除試劑盒：不費吹灰之力就能獲得最高質(zhì)量的DNA
這種單鏈DNA去除試劑盒為從PCR和其他酶促反應(yīng)中快速去除單鏈DNA提供了一種高效且經(jīng)濟的方法。
簡介
BcMag公司? 單鏈DNA去除試劑盒使用與高純度核酸外切酶I（ExoI）共價綴合的磁性微球從溶液中去除單鏈DNA。ExoI最初來自大腸桿菌。該酶是一種55 kDa的核酸外切酶，可在3'中逐步水解單鏈DNA（ssDNA）→5’方向。該核酸外切酶對單鏈DNA具有高度特異性，不會與雙鏈DNA或RNA以及末端3'-OH基團被磷酰基或乙酰基阻斷的DNA鏈反應(yīng)。核酸外切酶I耐受多種緩沖條件，通常可以添加到PCR反應(yīng)中。核酸外切酶I可以通過在80°C下熱處理15分鐘而失活。由于核酸酶穩(wěn)定且與磁珠共價固定，用ExoI固定的磁珠可以有效地從反應(yīng)中去除單鏈DNA，例如PCR引物，而溶液中不殘留核酸酶。
應(yīng)用程序
? PCR產(chǎn)物的預(yù)測序清理
? Megaprimer PCR用于定點突變
? 從核酸混合物中去除含有3’-羥基末端的ssDNA
? 測定具有3'-羥基末端的單鏈DNA的存在
特點和優(yōu)勢
· 有效的單管和無提取方案（圖1）。
· 超快：在不到30分鐘的時間內(nèi)處理96個樣品，時間少于10秒
· 因此，在反應(yīng)結(jié)束時回收的核酸酶可以重復使用。
· 容易從反應(yīng)中分離核酸酶。
· 固定化核酸酶的穩(wěn)定性增加。
· 成本效益：消除了色譜柱、過濾器、費力的有機試劑和所需的最少塑料制品。
· 高通量：與許多不同的自動化液體處理系統(tǒng)兼容。
工作流
配方：液體（在20 mM Tris-HCl（pH 7.5），0.1 mM EDTA，1 mM DTT和50%（v/v）甘油中提供）
活性：1μl磁珠將在37°C下于30分鐘內(nèi)在67 mM甘氨酸KOH（pH 9.5），6.7 mM MgCl2、1 mM DTT中消化0.5μg寡核苷酸。
反應(yīng)緩沖液：10倍反應(yīng)緩沖液670 mM甘氨酸KOH（25°C時pH 9.5），67 mM MgCl2,10 mM DTT。
裝運：在環(huán)境溫度下裝運。收到后，將磁性核酸酶珠保存在-20°C。等分試樣以避免反復冷凍和解凍
協(xié)議
A、 附屬設(shè)備
磁性機架
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項目 |
來源 |
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離心管磁性支架 **根據(jù)樣本量，用戶可以選擇以下磁性機架之一 |
· BcMag機架-2，用于容納兩個單獨的1.5 ml離心管（Bioclone，目錄號#MS-01） · BcMag機架-6，用于容納六個單獨的1.5 ml離心管（Bioclone，目錄號#MS-02） · BcMag Rack-24用于容納二十四個單獨的1.5-2.0 ml離心管（Bioclone，目錄號#MS-03） · BcMag Rack-50用于容納一個50 ml離心管，一個15 ml離心管和四個單獨的1.5 ml離心管（Bioclone，Cat。#MS-04） |
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BcMag 96孔板磁架。 |
· BcMag 96孔板磁性支架（側(cè)拉），與96孔PCR板和96孔微孔板或其他兼容支架兼容（Bioclone，目錄號：MS-05） |
B、 程序
· 不要使用含有有機溶劑的緩沖液。
· 通常，根據(jù)ssDNA的濃度，將珠子以所需的珠子量直接添加到任何標準緩沖液中（1μl磁珠將消化0.5μg寡核苷酸）
1. 搖動瓶子重新懸浮磁珠，直到它完全均勻。
重要！配藥前必須混合珠子。配藥前，不要讓珠子靜置超過2分鐘。重新懸浮磁珠每2分鐘。
2. 在反應(yīng)中加入適量的磁珠。
3. 通過緩慢上下移液20-25次，將樣品與珠子混合1-2分鐘，或以2000 rpm的轉(zhuǎn)速渦旋樣品2分鐘。
4. 在37°C下連續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育30分鐘。
5. 將樣品板或樣品管放在磁性支架上30秒或直到溶液澄清。
（選項：以3500 rpm離心45秒）
6. 將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的板/管中，同時樣品板保持在磁分離板上。該樣本已準備好用于下游應(yīng)用。
